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【病理科】我科开展人乳头瘤病毒核酸检测项目

发布时间:2022-08-01 17:04 本文来源: 病理科

我科开展人乳头瘤病毒核酸检测项目已经一年多了,由于初次开展此项目,技术与诊断方面不太成熟,未能及时做相关方面的先容,现在经过一年多的沉淀,科室内技术人员检测了近五千人的样本,技术与诊断方面已相当成熟,总结各项经验,在此做一个较为细致的先容。

人乳头瘤病毒,简称HPV,是一种DNA病毒,由病毒蛋白衣壳和核心单拷贝的病毒基因组DNA构成。可引起人类皮肤及粘膜的增生性病变,主要通过性生活或密切接触传播。HPV目前约有200种型别,根据致癌潜力,可分为高危型与低危型。高危型HPV持续感染可引发宫颈、外阴、阴茎等部位的癌前病变,低危型HPV持续感染可引起皮肤疣、生殖器疣、乳头状瘤等疾病。临床上,通过HPV核酸检测结合宫颈细胞检测可筛查高风险的宫颈细胞病变及宫颈癌。

目前我科制定标准化的人乳头瘤病毒核酸检测操作流程,规范从样本采集、运输、接收保存、检测到发布报告的全过程、确保检测结果的准确、可靠。现可检测24种基因型(6,11,16,18,31,33,35,39,42,43,44,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,81,82,83)人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)的核酸。

一、检测目的:

1.用于体外定性检测女性宫颈脱落上皮细胞样本中24种基因型,可鉴别病毒基因亚型。

2.采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术,主要用于对人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况进行定性检测并对核酸进行基因分型,用于临床HPV感染的辅助诊断。

3.可检测24种HPV基因型,并直接提示感染HPV的基因型,包括:

1) 18种高危型:HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,82,83;

2) 6种低危型:HPV6,11,42,43,44,81

二、检测原理:

采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术,检测24种人乳头瘤病毒核酸亚型。当待测样本加入到HPV检测芯片加样孔后,在微泵的驱动下,分别进行目的DNA的提取、针对目的DNA进行的PCR扩增和反向斑点杂交。根据HPV特定基因设计的特异性引物,可以扩增出24种HPV基因型的目的片段,仪器将扩增产物转移到芯片的检测区,在检测区杂交膜上包被有HPV24种亚型的检测探针,如果扩增产物中含有目的基因则能够被芯片上的探针捕获,再加入酶液和显色液后在杂交膜的特定位置出现蓝色的斑点,可判断出感染人乳头瘤病毒核酸及感染的亚型,如果不含目的基因,则在特定的位置不会出现蓝色斑点。(基因芯片法:指在固相支撑物上原位合成寡核苷酸或者大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支撑物表面,然后与标记的样本杂交,每一个探针对应一个点,通过对杂交信号的检测分析,得出样本的遗传信息。)

三、样本类型:

1.样本类型:直接采集的人体子宫颈口脱落细胞。

2.样本采集:以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈,用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去,取出宫颈刷置于宫颈口,单方向旋转4~5周以获得足量的上皮细胞样本,然后将宫颈刷头部放入洗脱管中,沿刷柄折痕处将宫颈柄刷折断,旋紧洗脱管盖,做好样本标识,并保持洗脱管直立放置。

四、样本保送与存放:

(1)、样本保存:样本一经采集,应尽快送检;样本室温保存不超过2小时,2~8℃保存不超过 1天,-20℃保存不超过3个月,避免反复冻融。

(2)、样本运输:冰壶或泡沫箱加冰袋密封运输,在途时限不超过48小时。

五、结果判定:

采用微量点样技术,将各位点检测探针与各种质控探针固定在杂交膜上,其中24种亚型HPV检测探针、空白对照、阴性对照各1个点,内参质控探针有3个不同浓度,每个浓度各1个点,显色质控探针重复3个点。探针排布图如图所示,排布说明见下表。

BC

11

GB-50

68

56

45

31

SP

NC

42

GB-20

73

58

51

33

16

81

43

GB-2

82

59

52

35

18

SP

44

6

83

66

53

39

SP

探针种类

探针名称

含义

探针名称

含义

质控探针

BC

空白对照探针

NC

阴性对照探针

SP

显色质控探针

GB

内参质控探针

HPV检测探针

低危型

6

HPV 6亚型检测探针

11

HPV 11亚型检测探针

42

HPV 42亚型检测探针

43

HPV 43亚型检测探针

44

HPV 44亚型检测探针

81

HPV 81亚型检测探针

高危型

16

HPV 16亚型检测探针

18

HPV 18亚型检测探针

31

HPV 31亚型检测探针

33

HPV 33亚型检测探针

35

HPV 35亚型检测探针

39

HPV 39亚型检测探针

45

HPV 45亚型检测探针

51

HPV 51亚型检测探针

52

HPV 52亚型检测探针

53

HPV 53亚型检测探针

56

HPV 56亚型检测探针

58

HPV 58亚型检测探针

59

HPV 59亚型检测探针

66

HPV 66亚型检测探针

68

HPV 68亚型检测探针

73

HPV 73亚型检测探针

82

HPV 82亚型检测探针

83

HPV 83亚型检测探针

1)、阳性结果判定:杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点,内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,且有HPV探针阳性斑点出现,提示样本为该探针对应亚型阳性;

2)、阴性结果判定:杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点,内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,且无HPV探针阳性斑点出现,提示该样本HPV为阴性。

3)、其他可能结果说明:若内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,无论GB-20和GB-2点有或没有阳性斑点,均提示内参扩增成功,不影响结果判定;若杂交膜的空白对照点或阴性对照点阳性,提示实验过程可能发生污染,实验不成功,建议重复试验;若杂交膜的SP点(3个)无阳性斑点,提示显色失败,实验不成功,建议重复试验;若杂交膜的SP点(3个)有阳性斑点,但内参质控点的GB-50点无阳性斑点,提示样本内参杂交失败,需对该样本做重复试验,若重复试验GB-50点仍无阳性,则判定样本采集不符合要求。

六:注意:

  1. 检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
  2. 可以检测HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、81、82、83共24种HPV亚型,对于其他基因型感染不能检出。
  3. 不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低均有可能导致假阴性结果。
  4. 未经验证的其他干扰可能会导致错误的结果。
  5. 临床说明:

本检测结果为阳性时,仅提示感染HPV,可进一步进行宫颈细胞学检查和阴道镜检查。本检测结果为阴性时,宫颈癌的患病率较低。

最后,非常感谢各科室老师给予的支撑,此项目的开展加强了科室之间的交流,促进我科室积极探索,不断提升医疗质量和技术水平,更好的为患者提供优质、安全、高效的医疗服务,推进www.340.com高质量发展。

病理科 高小茜

2022年7月31日

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